關(guān)于人白介素ELISA試劑盒的使用方法
人白介素ELISA試劑盒靈敏、高校、均勻、吸附性好、回收率高。是一種購買按全的ELISA試劑盒產(chǎn)品。用雙抗體夾心法測定人白細胞介素水平。純化后的人白細胞介素抗體用微孔板包被制成固體抗體。然后將抗體加入包被的單克隆抗體的微孔中,與HRP標記的IL抗體結(jié)合形成抗體-抗原-酶-抗體復(fù)合物。清洗后,加入基質(zhì)TMB顯色。
人白介素ELISA試劑盒的使用方法是什么呢?
1、試劑準備:所有試劑都須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2、加樣:加樣或試劑時,請注意,取樣/標準品、酶復(fù)合物或底物時,前孔與后孔加樣的時間間隔過大,會導(dǎo)致“孵育"時間不同,這將顯著影響測量值的準確性和重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品和所有樣品)控制在10分鐘以內(nèi)。如果樣品較多,建議用多通道移液管加樣。
3、孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時應(yīng)將反應(yīng)板放在一個用濕布覆蓋的封閉箱內(nèi),并對酶板進行覆蓋或涂膜,以防液體蒸發(fā);清洗后應(yīng)盡快進行下一步操作,酶板應(yīng)隨時保持干燥同時,嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4、洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5、試劑配制:使用前,檢測A和檢測B應(yīng)離心幾次或幾次以下,然后再使用,使液體沉積在管壁或瓶蓋上,直至管底。標準品、供試品溶液的工作液a和工作液B應(yīng)按要求量使用,并用相應(yīng)的稀釋劑配制,不能混淆。請務(wù)必配置好標準液和工作液,盡量不要微量配置(如果檢測液a被吸收,一次不得少于10μl),以免稀釋不準確造成濃度誤差;不要重復(fù)使用稀釋后的標準液、工作液a或工作液B。
6、反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7、底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。
如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。
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