細(xì)胞技術(shù)作為一項(xiàng)生命科學(xué)領(lǐng)域的重要技術(shù)，想要使用好自然是不容易。相信不少小伙伴在使用幾次之后，還是會(huì)有云里霧里的感覺。真正想掌握好一門技術(shù)，還是得從基礎(chǔ)部分就做好。

1.如何搭配流式抗體熒光標(biāo)記？

流式抗體熒光標(biāo)記搭配主要由3個(gè)因素決定：流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道、需要同時(shí)檢測(cè)多少個(gè)指標(biāo)、廠家的抗體有多少種熒光標(biāo)記。流式細(xì)胞儀的通道越多，那么同一份樣本能同時(shí)檢測(cè)的表面/胞內(nèi)/核內(nèi)蛋白就越多。以Calibur為例說明：Calibur的FL1通道選擇了FITC就不能選擇AlexaFluro488，或者選擇了Alexa Fluro488就不能選FITC；Calibur的FL3通道盡管能檢測(cè)PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5.5, PE-Cy7五個(gè)熒光素，但是我們搭配的時(shí)候只能選擇其中1個(gè)。

2.如果檢測(cè)的指標(biāo)數(shù)目超過了流式細(xì)胞儀的通道，怎么辦？

如果需要做5個(gè)指標(biāo)，而流式細(xì)胞儀只能做4個(gè)通道，首先將指標(biāo)歸成2類，再將樣本分成2份，分別檢測(cè)。比如需要同時(shí)檢測(cè)CD3、CD4、CD8、IL-4和IFN-gamma，可以將樣本分成兩份，第1份加CD3、CD4、CD8 和IL-4，而第2份加CD3、CD4、CD8和IFN-gamma。具體的歸類方式可根據(jù)課題的設(shè)計(jì)來(lái)進(jìn)行。

3.抗體染色的細(xì)胞不能立即檢測(cè)該如何處理？

如果實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞活性要求比較高，如凋亡實(shí)驗(yàn)，必須盡快檢測(cè)；如果實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞活性要求不高，可以使用含有4%多聚甲醛的PBS固定樣本30分鐘，固定后的細(xì)胞4℃過夜保存，次日檢測(cè)。

4.同型對(duì)照的作用是什么？

抗體有時(shí)會(huì)和非抗原結(jié)合，可能會(huì)因?yàn)榉翘禺惖牡鞍?/span>-蛋白相互作用結(jié)合細(xì)胞內(nèi)成分，因?yàn)槭杷饔媒Y(jié)合脂肪，也可能會(huì)結(jié)合一些細(xì)胞表面表達(dá)的抗體受體。比如，IgG亞型的抗體會(huì)結(jié)合細(xì)胞表面的Fc受體，如CD16、CD32和CD64。理想條件下，各種類型的非特異性結(jié)合都可以通過蛋白（BSA、牛奶或動(dòng)物血清）來(lái)阻斷。Fc受體的結(jié)合則可以通過與含免疫球蛋白的血清預(yù)孵育來(lái)阻斷。一個(gè)抗體非特異性相互作用和受體結(jié)合的情況，可以用無(wú)關(guān)抗原的相同亞型抗體來(lái)比照。