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雞皮質(zhì)酮 (CORT)Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)

2010-09-01 [1608]

【試劑盒名稱】
雞皮質(zhì)酮 (CORT)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)
【試劑盒用途】
定量檢測(cè)雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中皮質(zhì)酮 (CORT)的含量。
【檢測(cè)原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被雞皮質(zhì)酮 (CORT)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成,顏色的深淺與樣品中雞皮質(zhì)酮 (CORT)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中雞皮質(zhì)酮 (CORT)含量。
【試劑盒組成】
1
 酶標(biāo)包被板
 12孔×8條
 7
 顯色劑A液
 6mL
 
2
 標(biāo)準(zhǔn)品
 0.3mL×6管
 8
 顯色劑B液
 6mL
 
3
 20倍濃縮洗滌液
 25mL
 9
 終止液
 6mL
 
4
 樣本稀釋液
 6mL
 10
 說(shuō)明書(shū)
 1份
 
5
 特殊稀釋液
 6mL
 11
 封板膜
 2張
 
6
 酶標(biāo)試劑
 6mL
 12
 密封袋
 1個(gè)
 

備注:標(biāo)準(zhǔn)品(1號(hào)→6號(hào))濃度依次為:800、400、200、100、50、25 ng/L.
 
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。
6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。
12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。
【注意事項(xiàng)】
1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè),取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為25-800ng/L,超過(guò)此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果(25-800ng/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。
7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。
9、底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
 
 
【操作程序總結(jié)】
 
準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
 

 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板4次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
 
洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計(jì)算
 
【檢測(cè)范圍】
25ng/L - 800ng/L
【規(guī)格】
96人份/盒
【貯藏】
2-8℃,避光防潮保存。
【有效期】
6個(gè)月
 

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