酶聯(lián)免疫試劑盒競爭法測定小分子藥物時(shí)的酶標(biāo)記物
隨著政府對食品安全的檢測額重視程度,越來越多的藥物殘留小分子檢測試劑盒出現(xiàn),酶聯(lián)免疫試劑盒競爭法試劑盒是其中的主力軍,在采用酶聯(lián)免疫競爭法檢測小分子藥物的模式中常用的方法有:
1. 包被抗原,酶標(biāo)二抗進(jìn)行的間接競爭法,該方法的好處在于對*抗體不存在操作影響(沒有認(rèn)為的進(jìn)行標(biāo)記或其他處理),一抗活性好,并且抗原的包被一般不會(huì)出現(xiàn)過量包被造成IC50值較高,靈敏度降低的情況!但是該方法需要進(jìn)行兩次洗板操作過程麻煩,并且陰性O(shè)D值一半不會(huì)很高,多在2.0以下!線型范圍較小,度較低!
2. 包被抗原,酶標(biāo)一抗進(jìn)行的標(biāo)記抗體直接競爭法,該方法的好處在于操作簡單,一步完成,包被一般不會(huì)出現(xiàn)過量包被造成IC50值較高,并且游離的抗原更容易和標(biāo)記的抗體進(jìn)行反應(yīng),靈敏度和度較高,陰性顯色多在3.0以上。但是對于一抗進(jìn)行標(biāo)記難度較大,標(biāo)記和后期純化需要花費(fèi)功夫!
3. 包被抗體,標(biāo)記抗原進(jìn)行的標(biāo)記抗原直接競爭法,該方法的好處在于操作簡單,一步完成,由于標(biāo)記的抗原帶有HRP相對游離的抗原與包被的抗體更容易結(jié)合,并且小分子標(biāo)記后容易純化分離,沒有偶聯(lián)的小分子通過透析即可除去,并且包被一抗對抗體的活性沒有明顯影響!但是該方法采用包被抗體的方法很容易造成包被過量影響IC50值,并且小分子的標(biāo)記通常不能采用經(jīng)典的過碘酸鈉法,需要采用其他的化學(xué)方法,EDC。NHSEDC等,對酶的活性有一定的影響。
個(gè)人通過近期一些實(shí)驗(yàn)證明,直接競爭法IC50和線型范圍明顯優(yōu)于間接競爭法,標(biāo)記抗原和標(biāo)記抗體相對來說標(biāo)記抗原要稍好一些,關(guān)鍵在于后期純化方便!拋磚引玉!??!希望大家能夠針對此問題進(jìn)行專題討論!重點(diǎn)在于抗原抗體的標(biāo)記,以及抗原的合成改造!